Kako odrediti optimalnu koncentraciju?
Za induktor IPTG (izopropil-beta-d-tiogalaktozid), što veća koncentracija, to bolje.Optimalna koncentracija ovisi o specifičnim eksperimentalnim uvjetima i željenom učinku indukcije.
Općenito, koncentracija IPTG se koristi u rasponu od 0,1-1 mM.Niže koncentracije mogu smanjiti štetne učinke na rast stanica i mogu smanjiti citotoksičnost zbog prekomjerne ekspresije ciljnih proteina.Više koncentracije mogu uzrokovati prekomjerno metaboličko opterećenje stanice, utječući na rast stanice i učinkovitost ekspresije.
Način određivanja optimalne koncentracije može biti procjena razine ekspresije ciljnog proteina provođenjem IPTG indukcijskih testova pri različitim koncentracijama.Testovi male kulture mogu se izvesti pomoću raspona koncentracija IPTG (npr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM itd.), a učinak ekspresije pri različitim koncentracijama može se procijeniti otkrivanjem razine ekspresije ciljnog proteina (npr. Western blot ili fluorescentna detekcija).Prema eksperimentalnim rezultatima, kao optimalna odabrana je koncentracija s najboljim učinkom ekspresije.
Osim toga, također se možete pozvati na relevantnu literaturu ili iskustvo drugih laboratorija kako biste razumjeli uobičajeno korišteni raspon koncentracije IPTG u sličnim eksperimentalnim uvjetima, a zatim optimizirali i prilagodili prema eksperimentalnim potrebama.
Važno je napomenuti da optimalna koncentracija može varirati ovisno o različitim sustavima ekspresije, ciljnim proteinima i eksperimentalnim uvjetima, tako da je najbolje optimizirati od slučaja do slučaja.
Vrijeme objave: 28. rujna 2023