4-nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Učinak: ONPG je supstrat koji se posebno koristi za otkrivanje prisutnosti i aktivnosti enzima β-galaktozidaze.Kada je enzim β-galaktozidaza prisutan i aktivan, on cijepa ONPG u dva proizvoda: o-nitrofenol i derivat galaktoze.Oslobađanje o-nitrofenola rezultira promjenom žute boje, što se može izmjeriti pomoću spektrofotometra.

Primjena: ONPG ima nekoliko primjena u istraživanju molekularne biologije i biokemije:

Određivanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se obično koristi za mjerenje i kvantificiranje aktivnosti enzima β-galaktozidaze.Brzina stvaranja o-nitrofenola, koja je izravno proporcionalna aktivnosti enzima, može se mjeriti spektrofotometrijski.

Ekspresija i regulacija gena: ONPG se često koristi u eksperimentima koji se odnose na studije ekspresije i regulacije gena.Često se koristi u analizama fuzijskog proteina, kao što je često korišteni lacZ fuzijski sustav, za proučavanje ekspresije gena pod kontrolom specifičnih promotora.Aktivnost beta-galaktozidaze mjerena pomoću ONPG-a daje uvid u razinu ekspresije gena.

Probir aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se može koristiti kao kolorimetrijska metoda probira u tehnologiji rekombinantne DNA za utvrđivanje prisutnosti i funkcionalnosti gena LacZ, koji kodira β-galaktozidazu.Ova metoda probira pomaže u identificiranju klonova koji sadrže gen od interesa.

Studije kinetike enzima: ONPG je također koristan u proučavanju kinetike enzima β-galaktozidaze.Mjerenjem brzine reakcije enzim-supstrat pri različitim koncentracijama supstrata, moguće je odrediti kinetičke parametre kao što su Michaelis-Mentenove konstante (Km) i maksimalne brzine reakcije (Vmax).