4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Učinak: ONPG je supstrat koji se posebno koristi za detekciju prisutnosti i aktivnosti enzima β-galaktozidaze. Kada je enzim β-galaktozidaza prisutan i aktivan, on cijepa ONPG na dva produkta: o-nitrofenol i derivat galaktoze. Oslobađanje o-nitrofenola rezultira promjenom žute boje, što se može mjeriti spektrofotometrom.

Primjena: ONPG ima nekoliko primjena u istraživanjima molekularne biologije i biokemije:

Određivanje aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se obično koristi za mjerenje i kvantificiranje aktivnosti enzima β-galaktozidaze. Brzina stvaranja o-nitrofenola, koja je izravno proporcionalna aktivnosti enzima, može se mjeriti spektrofotometrijski.

Ekspresija i regulacija gena: ONPG se često koristi u eksperimentima vezanim uz studije ekspresije i regulacije gena. Često se koristi u testovima fuzijskih proteina, kao što je uobičajeno korišteni fuzijski sustav lacZ, za proučavanje ekspresije gena pod kontrolom specifičnih promotora. Aktivnost beta-galaktozidaze mjerena pomoću ONPG-a pruža uvid u razinu ekspresije gena.

Probir aktivnosti β-galaktozidaze: ONPG se može koristiti kao kolorimetrijska metoda probira u tehnologiji rekombinantne DNA za identifikaciju prisutnosti i funkcionalnosti gena LacZ, koji kodira β-galaktozidazu. Ova metoda probira pomaže u identifikaciji klonova koji sadrže gen od interesa.

Studije kinetike enzima: ONPG je također koristan u proučavanju kinetike enzima β-galaktozidaze. Mjerenjem brzine reakcije enzim-supstrat pri različitim koncentracijama supstrata moguće je odrediti kinetičke parametre kao što su Michaelis-Mentenove konstante (Km) i maksimalne brzine reakcije (Vmax).