Fenilgalaktozid CAS: 2818-58-8

Utjecaj na aktivnost enzima: Fenilgalaktozid se obično koristi za mjerenje aktivnosti enzima β-galaktozidaze. Kada β-galaktozidaza hidrolizira fenilgalaktozid, oslobađa p-nitrofenol. Akumulacija p-nitrofenola može se kvantitativno izmjeriti, što pruža uvid u aktivnost β-galaktozidaze. Ovaj se učinak koristi u primjenama kao što su enzimski testovi i sustavi za probir.

Analiza ekspresije gena: Fenilgalaktozid se često koristi kao supstrat u eksperimentima molekularne biologije za proučavanje ekspresije gena. Gen lacZ, koji kodira β-galaktozidazu, obično se spaja s regulatornim sekvencama drugih gena od interesa. Ekspresija gena lacZ i hidroliza fenilgalaktozida pomoću β-galaktozidaze mogu ukazivati ​​na obrazac ekspresije i razinu ciljnog gena koji se proučava.

Sustavi za probir: Fenilgalaktozid je važna komponenta sustava za probir koji koriste aktivnost β-galaktozidaze. Jedan široko poznat primjer je plavo-bijela metoda probira, koja se koristi za identifikaciju rekombinantnih ili transformiranih stanica u eksperimentima molekularne biologije. Kolonije koje su uspješno prihvatile rekombinantnu DNA ili su prošle genetsku rekombinaciju eksprimirat će β-galaktozidazu, što dovodi do hidrolize fenilgalaktozida i stvaranja plave boje.

Pročišćavanje proteina: U nekim slučajevima, fenilgalaktozid se može koristiti kao ligand za afinitetnu kromatografiju za pročišćavanje proteina koji se specifično vežu na β-galaktozidazu ili ih aktivira β-galaktozidaza. Protein od interesa može imati afinitetnu oznaku ili fuzijsku oznaku koja sadrži domenu koja veže β-galaktozidazu. Propuštanjem smjese proteina kroz kolonu s imobiliziranim fenilgalaktozidom, željeni protein može se selektivno zadržati i potom eluirati.